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    想利用離心機(jī)提取細(xì)菌的總DNA的簡(jiǎn)便方法，需要用沸水浴法提取，但是要15000rpm離心，能不能用普通的一般轉(zhuǎn)速（10000rpm）一下的代替呢！

SDS 高鹽法(方案1)
 　
　　具體步驟: 稱取1 g 土壤,放入研缽中,倒入適量的液氮,立即研磨;再倒入適量的液氮,研磨,重復(fù)3 次,使土壤顆粒研成粉末; 將13.5 ml 提取緩沖液(0.1 mol/L磷酸鹽 ,0.1 mol/L  EDTA  ,0.1 mol/L Tris-HCl  ,1.5 mol/L  NaCl ,1.0 % CTAB) 和50μl蛋白酶K(10 g/L  ) 與5 g 土壤置于50 ml 的離心管中,放入37 ℃恒溫?fù)u床上,225 r·min - 1振蕩30 min ；加入1.5 ml20 % SDS ,輕輕混勻,65 ℃水浴加熱2 h ,每隔15～30 min 輕輕搖勻1 次;5 000 r·min - 1離心10 min ,將上清液轉(zhuǎn)入新的50 ml 離心管中;取4.5 ml 提取緩沖液加入原離心管,搖勻泥漿,加入0.5 ml 20 % SDS ,65 ℃水浴15 min ,用上述同樣的離心速度離心10 min ,將上清液與原上清液合并;再重復(fù)此步驟1 次；用與上清液等量的三氯甲烷于離心管中混勻,5000 r·min - 1離心20 min ;收集上清液,并加入0.6 倍體積的異丙醇,室溫靜置1 h ;25 ℃下12 000 r·min - 1離心20 min ,倒出上清液,干燥后加入500μl 去離子水,溶解粘附于離心管壁的DNA/index.html'>DNA 及其雜質(zhì),并收集于1.5 ml 的微型離心管中。
 
 　　變性劑加SDS 高鹽法(方案2) 
 　　具體步驟： 取1 g 土樣和等量的滅菌石英砂在研缽中混合,加入1 ml 變性劑(4 mol/L異硫青酸胍,10mmol/L  Tris-HCl  ,1 mmol/L  EDTA ,0.5 % 2-巰基乙醇) ;液氮冰凍,研磨至溶解,重復(fù)3 次；轉(zhuǎn)入50 ml 離心管中,加入9 ml 提取緩沖液(0.1 mol/L磷酸鈉 , Tris-HCl  , 0.1 mol /L EDTA  ,1.5 mol/L  NaCl ,1 %CTAB ,2 %SDS) ;65 ℃水浴1 h ,每10 min 輕輕混勻1 次;5 000 r·min - 1 離心10 min ,取上清；在原管中加入5 ml 提取緩沖液,混合后,65 ℃水浴10min ,離心,取上清,合入上述上清液;重復(fù)一次;加入等體積的氯仿混合,5 000 r·min - 1離心20 min ,取上清;加入0.6 倍體積的異丙醇,室溫沉淀1 h ;20～25 ℃,12 000 r·min - 1離心20 min ,TE 溶解沉淀.
 
 　　SDS-酚氯仿抽提法（方案3）
　　具體步驟：稱取1g土壤樣品，加入1ml 0.1mol/l PH8.0 磷酸緩沖液，玻璃珠振蕩1min。溶菌酶5mg，使終濃度為2.5mg/ml,室溫振蕩15min,放置冰箱30min，加125ul 20%SDS振蕩處理15min，離心，分裝EP管，加酚（1：1體積），抽提1次，氯仿-異戊醇（1：1體積），抽提2次，加0.6體積異丙醇，室溫放置1h,離心，70%乙醇清洗，200Ul TE 溶解。
 
   　凍融溶菌酶SDS裂解法（方案4）
    具體步驟：取1g土壤樣品，加如0.5ml滅菌的抽提緩沖液（100 mmol/L Tris-HCl , 100 mmol/L EDTA, 200 mmol/L NaCl, 1.0% PVP, 2.0%CTAB , PH8.0）, 加玻璃珠旋渦5~10 min，在液氮中冷卻1 min后迅速在沸水中煮2 min，如此重復(fù)3次，13 000r/min離心10 min。上清夜快速置于冰上備用，沉淀用于進(jìn)一步裂解。將上述沉淀懸浮于0.2ml提取緩沖液中，旋渦10min，加入溶菌酶（100ml/l）50ul,輕輕混勻后，37C溫浴30min，再加入250ul SDS 緩沖液（100 mmol/l Tris-HCl, 200 mmol/l NaCl,2.0% SDS, PH8.0）,上下顛倒10min，13000 r/min離心10min,收集上清夜。